طريقة اجراء تحليل البراز بالتفصيل

يجب مراعاة آلاتي :


· يجب اخذ عينة البراز في وعاء بلاستيك نظيف بغطاء.

· يجب وضع بيانات صاحب العينة علي الوعاء.
· يجب التنبيه علي صاحب العينة بعدم خلط عينة البراز بمواد أخري مثل البول.
· يجب فحص العينة فور أخذها.
· ضرورة الاهتمام بالفحص الظاهري للعينة حتي يمكن اخذ فكرة جيدة وكاملة عن العينة قبل عملية التحضير.
· يجب التأكد ان الميكروسكوب صالح للعمل من حيث سلامة ونظافة العدسات ومن حيث الإضاءة والمسرح.
· التأكد من نظافة الشرائح الميكروسكوبية وكذلك غطاء الشرائح .
· يستحسن أن يبدأ فحص العينة تحت الميكروسكوب بالعدسة الشيئية وقوة تكبير x 10 حتى يتم مسح الشريحة كلها فإذا وجدت بويضات اشتبه فيها يتم الفحص بالعدسة الشيئية x 40
· بالنسبة للعينات التي تفحص للتأكد من وجود وحيدات الخلية بها Protozoa مثل الاميبا أو الجيارديا - لا مبليا يجب الفحص بالعدسة الشيئية ذات قوة التكبير x40 وذلك نظرا لصغر حجم وحيدات الخلية.
· في جميع الأحوال يجب أخذ اكثر من عينه من المريض ( ثلاثة عينات علي الأقل) وكذلك فحص اكثر من ( شريحة ) من العينة وتختار من أماكن مختلفة حتى يمكن الحكم علي نتيجة العينة جيدا.

تركيز الطفيليات في عينات البراز :

هناك عدة طرق لتركيز الطفيليات منها على سبيل المثال:


1. طريقة محلول صوديوم ( ويليس):

تصلح لمعظم الطفيليات ما عدا الديدان المفلطحة والبلهارسيا والفاشيولا وكذلك الديدان الأسطوانية.


2. طريقة الفور مول والأثير (MIF):

تصلح لمعظم الطفيليات ما عدا الأطوار النشطة من الأميبا والجيارديا.


3. هاردي أموري Harady Mori :

ليرقات الأسترنجلويدس.


4. طريقة كاتو Kato Tech. :

تصلح لبعض الطفيليات مثل الفاشيولا والبلهارسيا المعوية وغيرها وتفيد في فحص البويضات المعوية ولكن لا تصلح مع الأكياس أو اليرقات أو البويضات رقيقة الجدار مثل الأنكلستوما.
وبالطبع يتم اختبار الطريقة المناسبة تبعا للتجهيزات المتوفرة والوقت اللازم وكذلك نوع الطفيليات التي نبحث عنها.
وسنوجز الحديث هنا علي طريقتين لتركيز البويضات ويرقات الطفيليات.

1. طريقة الفورمول والأثير لتركيز الطفيليات :
Formol Ether Concentration Tech.



الأدوات المطلوبة :

سنترفيوج كهربائي - أنابيب سنترفيوج بسدادة - زجاجات صغيرة - مخبار مدرج - قمع


المحاليل المطلوبة :

1. فورمالدهيد ( فورما لين ) 50 مل + 450 مل ماء مقطر
2. أيثير.
3. محلول ملح كلوريد الصوديوم ( فسيولوجي)
كيفية العمل :

1. يؤخذ حوالي 2 مل من البراز في زجاجة صغيرة بسدادة وتمزج مع 10 مل محلول ملحي فسيولوجي وترج.
2. ترشح خلال طبقتين من الشاش في أنبوبة سنترفيوج حجم 10 مل.
3. تدار في السنترفيوج الكهربائي لمدة دقيقة واحدة وإذا كان السائل العلوي عكرا يضاف 10 مل أخري من كلوريد الصوديوم الفسيولوجي أكثر من مرة وتدار لمدة دقيقة أخري حتى يصبح السائل العلوي رائقا ويسكب الرائق ويترك الراسب في الأنبوبة.
4. يضاف 10 مل من محلول الفورمالين إلي الراسب بالأنبوبة ويحرك ويمزج جيد ويترك لمدة 5 دقائق.
5. يضاف 3 مل من الأثير أو البنزين وتغلق الأنبوبة وترج بشدة لمدة 2/1 دقيقة ثم تدار في السنترفيوج لمدة دقيقة.
يتكون في الأنبوبة أربع طبقات الطبقة الأولي
: أيثير
الطبقة الثانية
: فضلات
الطبقة الثالثة
: محلول فورما لين
الطبقة الرابعة
: الراسب محتوي علي الطفيليات

6. يتم التخلص من الطبقات العلوية الثلاثة من الأنبوبة ويترك الراسب فقط ويمزج هذا الراسب جيدا.
7. تؤخذ نقطتين وتوضع علي شريحة بحيث توضع كل نقطة في مكان منفصل عن الآخر وتغطي النقطة الأولي بغطاء الشريحة أما الثانية فيضاف إليها نقطة محلول يود وتغطي بغطاء.
8. تفحص النقطة الأولي بالعدسة x10 ، x 40 لجميع الطفيليات وتعد.
9. تفحص النقطة الثانية بالعدسة x10، x 40 للبحث عن الأكياس وعددها.
ملحوظة:
يمكن شراء محلول MIF جاهزا للاستخدام بدلا من محلول الفورمالين والأيثير مع إجراء كل الخطوات بنفس الطريقة السابقة.


2. طريقة كاتو :
Kato Technique

تستخدم هذه الطريقة حاليا عل نطاق واسع في فحص عينات البراز للطفيليات المعوية وخصوصا بويضات الفشيولا و البلهارسيا المعوية وكذلك الهتروفيس وغيرها.
وللطريقة مزايا عديدة أهمها :
1- تستخدم للفحص وكذلك لعد البويضات لتقدير شدة الإصابة.
2- يمكن الاحتفاظ بالشرائح المصبوغة لمدة حوالي 6 شهور.
ومن عيوبها:
لا تصلح للكشف عن وحيدة الخلية أو يرقات الاسترنجلويدس أو بويضات رقيقة الجدار ، لذا يجب الفحص بطريقة اللطخة بالإضافة إلي كاتو لدقة الفحص.


1. الأدوات :

شرائح زجاجية - مربع كاتو - مصفاة كاتو - مراود بلاستيك - جفت صغير - سلوفان - صبغة ملاكيت جرين مخفف ومركز (أنظر جدول التحضيرات)


2. الطريقة

أ - تحضر شريحة نظيفة وترقم ويوضع عليها مربع كاتو.
ب - توضع مصفاة فوق العينة ويؤخذ بطرف المرود من علي المصفاة.
ج - توضع العينة التي بالمرود داخل مربع كاتو حتى يمتلئ الفراغ بالعينة.
ء - يرفع المربع البلاستيك وتغطي العينة بالسيلوفان المشبع وتفرد جيدا وتحضن علي 37 درجة أو في ضوء مباشر لمدة ساعتين ثم تفحص.

الفحص الظاهري:


· القوام : القوام الطبيعي لعينة البراز متماسكFORMED) اما اذا كان القوام لين (SOFT) أو إسهال أو مثل الماء الأرز فهذا يدل علي حالات غير طبيعية ويجب الاهتمام بالبحث عن السبب.

· اللون : اللون الطبيعي لعينة البراز بني في الكبار وأصفر في الأطفال حديثي الولادة أما إذا كان أخضر أو أسود مدمم فهذا يدل علي حالات غير طبيعية.
· الرائحة : الرائحة المميزة للبراز رائحة برازية ولكن في بعض الحالات غير الطبيعية تكون رائحة البراز نفاذة وعفنة.
· مخاط وصديد ودم : وجود المخاط والصديد والدم والدهون بكثرة في البراز يعتبر غير طبيعي.
· طفيليات : مثل ديدان الإسكارس والشريطية والاكسيورس.


الفحص الميكروسكوبي:



1- اللطخة (Direct Smear)

هذه الطريقة سهلة وسريعة وتستخدم أساسا لفحص أكياس الطفيليات ذات الخلية الواحدة مثل الاميبا وأكياسها والجيارديا - لامبليا وأكياسها
تتلخص خطوات هذه الطريقة كآلاتي :


· ضع قطعة صغيرة من البراز وبالذات الجزء الذب به دم أو مخاط ومن علي السطح بواسطة مرود خشبي وأمزجها جيدا علي الشريحة بواسطة المرود.

· ضع غطاء الشريحة (Cover) وافحص العينة تحت الميكروسكوب مستعملا العدسة الشيئية X 10 ثم بعد ذلك بالعدسة الشيئية X 40 محاولا العثور علي الطفيليات وحيدة الخلية ثم بعد ذلك ضع نقطة من محلول اليود المائي وذلك حتى يسهل التعرف علي أكياس الاميبا لأنها تأخذ لون اليود دون غيرها.

ملحوظة :
ضع محلول اليود المائي بهد الانتهاء من الفحص الأولي بمحلول الملح لان اليود يقتل الطفيليات وحيدة الخلية غير المتكيسة ( تروفوزنت ) .
2- الترسيب (Sedimentation)

وتستخدم هذه الطريقة لتحضير عينات البراز بغرض فحص الطفيليات التي تكون بويضاتها أثقل وزنا من محلول الملح المخفف وبالتالي تترسب البويضات ، مثل بويضات الإسكارس الملقحة ، بويضات البلهارسيا بنوعيها ، يرقات سترنجلويدس وبويضات الفشيولا والهيمنولبس نانا ودمنيوتا.
الخطوات :


· تؤخذ قطعة من البراز بحجم البندقية وتوضع في إناء زجاجي سعة 60 مل يضاف محلول ملح الطعام المخفف ( 0.007%) إلي ربع الإناء.

· يقلب البراز في المحلول جيدا بواسطة مرود زجاجي.
· يصفي تلقائيا بمصفاة من سلك النحاس في كأس مخروطي.
· يترك الكأس هادئا لمدة 20 - 30 دقيقة.
· يفحص الراسب بواسطة أخذ جزء منه بواسطة ماصة ويوضع علي شريحة ميكروسكوب وتغطي بغطاء الشريحة. ·


3- التعويم (Floatation)

وتستخدم هذه الطريقة لتحضير عينات البراز بغرض فحص الطفيليات التي تكون بويضاتها أخف وزنا من محلول الملح المشبع وبالتالي تعوم البويضات علي السطح مثل بويضات الانكلوستوما ، الاكسيورس ، الإسكارس غير الملقحة ، التينيا وبويضات التريكوكفلس ( تريكوريس تريكيورا ) وبويضات الهتروفيس.
الخطوات :


· تؤخذ قطعة من البراز في حجم حبة الفول الصغيرة وتوضع في إناء من الزجاج سعة 60 مل مع قليل من الملح المشبع ( يحضر بإضافة واحد كيلو جرام لكل 2 لتر ماء ) بقدر ربع الإناء.

· تمزج قطعة البراز بواسطة مرود زجاجي.
· يصفي المحلول بمصفاة من سلك نحاسي معد لذلك - توضع المصفاة في القمع في فوهة القلماية ( دورق مخروطي ) .
· يكمل ملء القلماية الزجاجية بنفس محلول الملح حتى فوهتها العليا .
· توضع شريحة فوق فوهة القلماية.
· تترك لمدة 20 - 30 دقيقة ثم ترفع الشريحة باحتراس وتقلب وتوضع تحت الميكروسكوب.

4- مسحة شرجية لفحص الاكسيورس ( طريقة السيلوتيب)
The sellotape Swab For Enterobius Vermecularis

دودة الاكسيورس تعيش في الأمعاء الغليظة ، وتخرج أنثي الاكسيورس خارج فتحة الشرج ليلا وتضع بويضات الاكسيورس علي الجلد المحيط بفتحة الشرج ولهذا يتم عمل مسحة حتى يتم التقاط هذه البويضات . وهناك أكثر من طريقة لعمل هذه المسحة وسوف نشرح اسهل هذه الطرق أكثرها شيوعا من الناحية العملية.


· خذ قطعة من السيلوتيب الشفاف واثنيها علي طرف خافض لسان خشبي أو أنبوبة اختبار بحيث يكون سطحها اللاصق للخارج.

· ضع الخافض أو الأنبوبة بين فخذي الطفل بحيث يصل ألي منطقة الشرج فإذا وجدت بويضات الاكسيورس فسوف تلتصق علي السيلوتيب.
· الصق السيلوتيب علي شريحة ميكروسكوب ثم افحصها تحت الميكروسكوب.
· كن حريصا حتى لا تلوث يداك وذلك بلبس قفاز بلاستيك.

بويضات الطفيليات الأكثر شيوعا والتي يمكن رؤيتها بالميكروسكوب سواء بصبغة أو بدون.